苦參堿誘導(dǎo)胃細(xì)胞自噬和凋亡測試報(bào)價(jià)低

西安齊岳生物科技有限公司提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包：小鼠活體成像、藥代動(dòng)力學(xué)、基因敲除、動(dòng)物造模等。西安齊岳生物為研究界提供的正常人和動(dòng)物細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基和試劑，基因分析工具，外泌體，細(xì)胞衍生的分子生物學(xué)產(chǎn)品，基于細(xì)胞的檢測試劑盒和干細(xì)胞產(chǎn)品?？蛻粼诩?xì)胞培養(yǎng)過程中，有問題可以咨詢售后服務(wù)

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苦參堿誘導(dǎo)胃細(xì)胞自噬和凋亡測試報(bào)價(jià)低相關(guān)文獻(xiàn)：

苦參堿是從傳統(tǒng)中藥苦參中提取的一種生物堿,具有的藥理作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究苦參堿對胃SGC-7901細(xì)胞的作用,闡明自噬和凋亡在苦參堿胃過程中的作用,并進(jìn)一步證明苦參堿誘導(dǎo)細(xì)胞自噬發(fā)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,為中藥單體及聯(lián)合用藥胃提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 用SRB法檢測細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測苦參堿對細(xì)胞周期的影響。Annexin-V-FITC/PI雙染檢測不同濃度苦參堿對細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。用倒置相差顯微鏡觀察苦參堿干預(yù)后SGC-7901細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,并用透射電鏡進(jìn)一步觀察細(xì)胞的微結(jié)構(gòu)變化。同時(shí)用MDC染色后通過熒光顯微鏡鑒定自噬的發(fā)生。應(yīng)用western blot檢測自噬分子標(biāo)記物L(fēng)C3表達(dá)水平,從分子生物學(xué)水平檢測細(xì)胞自噬水平的改變。用自噬劑、自噬誘導(dǎo)劑、凋亡劑分別聯(lián)合苦參堿干預(yù)胃細(xì)胞,調(diào)控苦參堿誘導(dǎo)的自噬和凋亡,用’PI染色檢測其對苦參堿誘導(dǎo)的胃細(xì)胞死亡率的影響,后用western blot檢測PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信號(hào)通路的相關(guān)分子是否參與苦參堿誘導(dǎo)的自噬過程,并用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測促凋亡基因Bax和自噬相關(guān)基因Beclin1的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果 苦參堿能SGC-7901,呈時(shí)間劑量依賴性,并將SGC-7901細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的G0/G1期。Annexin-V-FITC/PI雙染結(jié)果顯示苦參堿以劑量依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,與對照組相比,當(dāng)用0.5、1.0和2.0mg/ml的苦參堿處理SGC-7901細(xì)胞后,凋亡率分別上升72.92±3.41%、77.75±2.19%和83.28±2.75%。倒置相差顯微鏡觀察到苦參堿干預(yù)后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,在細(xì)胞質(zhì)中可見大量的大小不等的空泡,而且隨著苦參堿濃度的增加胞質(zhì)中的空泡逐漸增大增多。透射電鏡進(jìn)一步苦參堿干預(yù)后的SGC-7901細(xì)胞內(nèi)有大量自噬泡形成。MDC染色熒光顯微鏡檢測可見苦參堿組比未處理組顯示更強(qiáng)的熒光信號(hào)和更多的MDC標(biāo)記顆粒(?)Western blot結(jié)果顯示苦參堿誘導(dǎo)胃細(xì)胞LC3-Ⅱ表達(dá)水平以時(shí)間和劑量依賴性增加,并且為苦參堿細(xì)胞自噬活性而非自噬體降解所導(dǎo)致的LC3-Ⅱ。PI染色流式細(xì)胞儀檢測顯示細(xì)胞死亡率隨著苦參堿濃度的增加而,用自噬劑3-MA或巴弗洛霉素A1聯(lián)合干預(yù)后,苦參堿誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡率進(jìn)一步增加,并且在透射電鏡下可見到部分苦參堿干預(yù)細(xì)胞出現(xiàn)的凋亡形態(tài)學(xué)改變并且細(xì)胞內(nèi)自噬泡減少,Annexin-V-FITC/PI雙染結(jié)果進(jìn)一步自噬能增加苦參堿誘導(dǎo)的凋亡,并且自噬劑能增加苦參堿對胃的作用。用caspase劑或自噬誘導(dǎo)劑聯(lián)合干預(yù)降低了苦參堿誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡率。Western blot檢測結(jié)果顯示苦參堿干預(yù)后,盡管總Akt和總mTOR表達(dá)水平輕度降低,但Akt (Ser473)磷酸化水平以時(shí)間和劑量依賴性,其下游效應(yīng)分子mTOR (Ser2448)和p70S6K (Thr389)的磷酸化水平也輕度。實(shí)時(shí)定量RT-PCR顯示苦參堿上調(diào)促凋亡基因Bax和自噬基因Beclin1的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)論 苦參堿對胃具有的抗活性,而且苦參堿誘導(dǎo)胃細(xì)胞死亡時(shí)凋亡和自噬均被。自噬是胃細(xì)胞的適應(yīng)性反應(yīng),了細(xì)胞存活,自噬能夠苦參堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,因此聯(lián)合自噬劑是進(jìn)一步苦參堿抗作用的策略。另外,PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信號(hào)通路可能未參與苦參堿誘導(dǎo)的自噬過程。

根據(jù)客戶的需求提供的動(dòng)物模型，用來檢測科研的性。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有非人類靈長動(dòng)物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠等種類。目前，我們已經(jīng)建立多個(gè)動(dòng)物模型，并經(jīng)過多方驗(yàn)證和實(shí)踐考驗(yàn)。同時(shí)，我們員工豐富的經(jīng)驗(yàn)與雄厚的理論基礎(chǔ)能夠靈活地根據(jù)客戶的定制要求研究建立定制模型以滿足客的需求。

溫馨提示：西安齊岳生物供應(yīng)的化學(xué)試劑、納米材料、藥動(dòng)學(xué)外包產(chǎn)品用于科研（zhn2020.3月）